DNA提取：對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液（固體標本加入50μL核酸提取液），100℃恒溫處理10min，13,000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存。檢測方法的局限性：
a.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
b.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
c.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
d.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
e.不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
f.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；
g.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
結(jié)果判斷：
陽性：檢測通道Ct值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。
可疑：檢測通道Ct值>35.0，且出現(xiàn)典型擴增曲線的樣本建議重復(fù)試驗，重復(fù)試驗結(jié)果出現(xiàn)Ct值≤35.0和典型擴增曲線者為陽性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測結(jié)果無Ct值且無明顯的擴增曲線。
質(zhì)控標準：
陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線或無Ct值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且Ct值≤32；以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。
